ⅠNחומצה יוקלאיתiהקדמה
חומצת גרעין מחולקת לחומצה דאוקסיריבונוקלאית (DNA) וחומצה ריבונוקלאית (RNA), ביניהן RNA מחולק ל-RNA ריבוזומלי (rRNA), RNA שליח (mRNA) והעברת RNA (tRNA) לפי תפקידיו השונים.ה-DNA מרוכז בעיקר בגרעין, במיטוכונדריה ובכלורופורם, בעוד שה-RNA מופץ בעיקר בציטופלזמה.כבסיס החומרי לביטוי גנים, מיצוי חומצת גרעין ממלא תפקיד חשוב ביותר במחקר ביולוגיה מולקולרית ובאבחון מולקולרי קליני.הריכוז והטוהר של מיצוי חומצת גרעין ישפיעו ישירות על ה-PCR שלאחר מכן, רצף, בניית וקטור, עיכול אנזים וניסויים אחרים.
Ⅱ שיטת מיצוי וטיהור חומצת גרעין
① שיטת מיצוי פנול/כלורופורם
מיצוי פנול/כלורופורם היא שיטה קלאסית למיצוי DNA, המשתמשת בעיקר בשני ממיסים אורגניים שונים לטיפול בדגימות, המסת חומצת גרעין מבוססת DNA בשלב המים, שומנים בשלב האורגני וחלבונים בין שני השלבים.לשיטה זו יש את היתרונות של עלות נמוכה, טוהר גבוה והשפעה טובה.החסרונות הם פעולה מסובכת וזמן ארוך.
② שיטת טריזול
שיטת טריזול היא שיטה קלאסית למיצוי RNA.שיטת Trizol מחולקת לפאזה מימית ולפאזה אורגנית לאחר צנטריפוגה עם כלורופורם, שבה ה-RNA מומס בשלב המימי, הפאזה המימית מועברת לשפופרת EP חדשה, מתקבלת משקעים לאחר הוספת איזופרופנול ולאחר מכן טיהור אתנול.שיטה זו מתאימה למיצוי RNA מרקמות של בעלי חיים, תאים וחיידקים.
③ שיטת טיהור עמוד צנטריפוגלי
שיטת טיהור עמודת צנטריפוגה יכולה לספוג DNA באופן ספציפי דרך חומרי ספיחה מיוחדים של מטריצת סיליקון, בעוד ש-RNA וחלבון יכולים לעבור בצורה חלקה, ולאחר מכן להשתמש במלח גבוה נמוך PH כדי לשלב חומצה גרעין, מלח נמוך גבוה PH ערך להפרדה וטיהור חומצת גרעין.היתרונות הם ריכוז טיהור גבוה, יציבות גבוהה, אין צורך בממס אורגני ועלות נמוכה.החיסרון הוא שצריך לצנטריפוגה צעד אחר צעד, עוד שלבי פעולה.
④ שיטת חרוזים מגנטיים
שיטת החרוזים המגנטיים היא לפצל את דגימת רקמת התא דרך הליזאט, לשחרר את חומצת הגרעין בדגימה, ואז מולקולות חומצת הגרעין נספגות במיוחד על פני השטח של החרוז המגנטי, בעוד זיהומים כגון חלבונים וסוכרים נשארים בפנים. הנוזל.באמצעות השלבים של פיצול רקמת התא, קשירת חרוז מגנטי עם חומצת גרעין, שטיפת חומצת גרעין, פליטת חומצות גרעין וכו', מתקבלת לבסוף חומצת גרעין טהורה.היתרונות הם תפעול פשוט ושימוש קצר, ללא צורך בצנטריפוגה שלב.יש לו דרישות טכניות נמוכות והוא יכול לממש פעולה אוטומטית והמונית.השילוב הספציפי של חרוז מגנטי וחומצת גרעין הופך את חומצת הגרעין המופקת עם ריכוז וטוהר גבוהים.החיסרון הוא שמחיר השוק הנוכחי יקר יחסית.
⑤ שיטות אחרות
בנוסף לארבע השיטות הנ"ל, קיימות פיצוח רותח, שיטת מלח מרוכז, שיטת דטרגנט אניוני, שיטה אולטראסונית ושיטה אנזימטית וכו'.
Ⅲ סוג מיצוי חומצת גרעין
ל-Foregene יש את פלטפורמת Direct PCR המובילה בעולם, פלטפורמת בידוד RNA דו-עמודה (DNA בלבד + RNA בלבד).המוצרים העיקריים כוללים ערכות בידוד DNA/RNA, סדרת ריאגנטים למעבדה מולקולרית של ריאגנטים PCR ו- Direct PCR.
① מיצוי RNA כולל
דגימות מיצוי כולל של RNA כוללות דם, תאים, רקמות בעלי חיים, צמחים, וירוסים וכו'. ניתן להשיג טוהר גבוה וריכוז גבוה של RNA כולל באמצעות מיצוי RNA כולל, אשר ניתן להשתמש בו ב-RT-PCR, ניתוח שבבים, תרגום חוץ גופית, שיבוט מולקולרי, Dot Blot וניסויים אחרים.
Foregene קשורערכות בידוד RNA
ערכת בידוד כולל RNA של בעלי חיים--חילוץ מהיר ויעיל של RNA כולל בטוהר גבוה ואיכותי מרקמות בעלי חיים שונות.
ערכת בידוד RNA Total RNA--ניתן להשיג RNA כולל מטוהר ואיכותי מתאי תרבות שונים תוך 11 דקות.
ערכת בידוד כולל RNA של צמחים--מיצוי במהירות RNA כולל באיכות גבוהה מדגימות צמחים עם תכולת פוליסכרידים ופוליפנולים נמוכה.
ערכת בידוד RNA ויראלי- לבודד ולטהר במהירות RNA ויראלי מדגימות כגון פלזמה, סרום, נוזלי גוף נטולי תאים וסופרנטנטים של תרבית תאים.
② מיצוי DNA גנומי
דגימות מיצוי DNA גנומי כוללות אדמה, צואה, דם, תאים, רקמות בעלי חיים, צמחים, וירוסים וכו'. מיצוי DNA גנומי יכול לשמש בעיכול אנזימים, בניית ספריית DNA, PCR, הכנת נוגדנים, ניתוח הכלאה של Western blot, שבב גנים, גבוה רצף תפוקה וניסויים אחרים.
Foregene קשורערכות בידוד DNA
ערכת בידוד רקמות של בעלי חיים- מיצוי וטיהור מהירים של DNA גנומי ממקורות מרובים, כגון רקמות של בעלי חיים, תאים וכו'.
ערכת Midi DNA בדם (1-5 מ"ל)- טהר במהירות DNA גנומי באיכות גבוהה מדם נוגד קרישה (1-5 מ"ל).
ערכת בידוד DNA של ספוגית בוקאלית/כרטיס FTA- טהר במהירות DNA גנומי באיכות גבוהה מדגימות ספוגית חזה/FTA Card.
ערכת בידוד DNA של צמחים- טהר והשיג במהירות DNA גנומי באיכות גבוהה מדגימות צמחים (כולל רב סוכרים ודגימות צמחים פוליפנולים)
③ מיצוי פלסמיד
פלסמיד הוא מעין DNA מולקולה קטנה מעגלית בתאים, המהווה נשא נפוץ לרקומבינציה של DNA.שיטת מיצוי הפלסמיד היא הסרת RNA, הפרדת פלסמיד מ-DNA גנומי חיידקי והסרת חלבון וזיהומים אחרים כדי לקבל פלסמיד טהור יחסית.
General Plasmid Mini Kit- טהר במהירות DNA פלסמיד באיכות גבוהה מחיידקים שעברו טרנספורמציה עבור ניסויים שגרתיים בביולוגיה מולקולרית כגון טרנספורמציה ועיכול אנזים
④ סוגי מיצוי אחרים, מיצוי miRNA וכו'.
ערכת בידוד מירנה לבעלי חיים--לחלץ במהירות וביעילות שברי RNA קטנים של 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA מרקמות ותאים שונים של בעלי חיים
Ⅳ הדרישות למיצוי וטיהור חומצת גרעיןs
① כדי להבטיח את שלמות המבנה הראשוני של חומצת גרעין.
② הפחת את ההפרעה של חלבונים, סוכרים, שומנים ומקרומולקולות אחרות
③ לא צריך להיות ממס אורגני או ריכוז גבוה של יוני מתכת שיכולים לעכב את האנזים בדגימות חומצת גרעין.
④ יש לבטל זיהום RNA וחומצות גרעין אחרות בעת מיצוי DNA, ולהיפך.
זמן פרסום: 24 בנובמבר 2022
